首先需要确定载体。构建的融合蛋白需要得到表达,因此可选择质粒表达载体。
质粒表达载体必需的条件包括选择标记、复制起点、启动子、起始密码子、多克隆位点和转录终止子。
T7启动子系统是目前常用的表达系统,含有T7启动子、核糖体结合位点、起始密码子、多克隆位点和转录终止子。
T7启动子的RNA聚合酶有特殊菌株的基因组表达,该聚合酶基因以噬菌体溶源途径整合入细菌基因组,由IPTG诱导表达。
在表达载体上构建好融合蛋白基因后,转入宿主菌,在IPTG的诱导下表达出融合蛋白。
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T7启动子的RNA聚合酶有特殊菌株的基因组表达,该聚合酶基因以噬菌体溶源途径整合入细菌基因组,由IPTG诱导表达。
在表达载体上构建好融合蛋白基因后,转入宿主菌,在IPTG的诱导下表达出融合蛋白。