位于贵州普定县城西5千米处的一座孤山上。是旧石器时代晚期遗址，距今约10000余年。穿洞遗址因为洞口南北对穿而得名。山高87米，在山腰的石灰岩中形成了一个大洞，洞口高出地面约26米，洞内高9米，宽13米，长18米。遗址发现于1978年秋，1979年5月试掘，获得大量石器、骨器和哺乳动物化石百余件。1981年和1983年，中国科学院和贵州省博物馆联合发掘，出土石器、骨器、动物化石和人类化石2000多件，包括石斧、石锤、石刀等众多种类，其中以刮削器的数量为最；磨光骨器1000多件；此外还发现了用火遗迹以及鹿、鹿、箭猪、熊、虎、板齿鼠等10多种哺乳动物的化石。出土有人类化石近百件，包括一个完整的头盖骨及下颌骨、股骨、桡骨、牙齿近百件。
穿洞遗址出土的磨光骨器最具特色，如骨针、骨椎、骨铲、骨权等，其数量之众多，内容之丰富，类型之多样，加工技术之精湛，在中国是十分的罕见，为研究中国旧石器时代骨器的类型、用途、加工工艺等问题，为研究中国西南原始社会提供了丰富的实物资料。
我国著名考古学家、北京猿人头盖骨的发现者裴文中教授生前实地考察了穿洞遗址，肯定了“穿洞文化”在中国考古学上的价值和地位，亲笔题写了“普定穿洞旧石器文化遗址”。考古界确认 了“穿洞文化”的命名，该遗址具有重要的考古研究价值和极高的学术地位，为研究我国西南原始社会提供了丰富的实物资料，将建为古文化遗址博物馆。1990年国务院正式公布穿洞遗址为为数甚少的国家级重点文物保护单位。