在酶活性测定时，如果底物或产物不能直接测定或难于准确测定，可采用酶偶联法测定，即在反应体系中加入一个或几个工具酶，将待测酶生成的某一产物转化为新的可直接测定的产物，当加入酶的反应速度与待测酶反应速度达到平衡时，可以用指示酶的反应速度来代表待测酶的活性。例如：
Ex Ea Ei
A → B → C→p
式中A为底物，B、C为中间产物，P为可直接测定的产物；Ex为待测酶，Ea和Ei都为工具酶，依据工具酶作用的不同又分别称为辅助酶和指示酶；辅助酶在酶偶联反应中可以一个或多个，也可以不需要；指示酶是指能监测反应速度的酶。临床酶学分析中，以NAD（P）H/ NAD（P）+为辅酶的脱氢酶和以H2O2为底物的过氧化物酶（POD）是常用的指示酶。
