自杀载体是指能在一种宿主内复制但在另一宿主中却不能的质粒或噬菌体。又分别称之为自杀质粒和自杀噬菌体。
自杀载体的一种简单形式是窄宿主范围质粒，例如那些基于CloE1样复制子的质粒。这类质粒只能在肠杆菌及关系很近的菌种中复制。其它形式的条件性复制载体有一个温度敏感复制子，或在必需基因内有一无义突变。自杀质粒应具备三个条件：⑴自杀质粒在受体菌内不能复制。⑵自杀质粒必须带有一个在整合到染色体内以后，可供选择的抗性标记。⑶自杀性质粒带有易于克隆的多克隆位点。除一些特殊构建的用于G－的自杀质粒外，对于那些易于转化的G＋而言，稍加改造的用于G－的质粒就可用作自杀质粒，因为G－的质粒在G＋中不能复制。因此只需在一些G－的质粒上加上能在G＋中表达的抗性基因即可。保证了以上几点，自杀载体完全可以自己构建，但是在构建时，要注意以下方面：1、连接质粒载体和DNA插
入片断时：（1）初次实验的可以建立几种不同的连接体系，比如插入片段与载体分子数比率可以为3：1，1：1，或1：3。（2）可以尝试三种温度和时间的连接如4度，过夜；15度，4－6小时；25度，1小时。2、细菌转化和筛选时：（1）如果是感受态细胞，－80度储存的在5－6周后,转化率低。可用一已知标准闭环质粒鉴定感受态细胞的转化能力；（2）用无DNA
转化物的感受态细菌铺板，如果有菌落生长，说明其中抗生素浓度不够。这种方法使用的载体是条件性复制载体：能够在供体菌中复制，不能在受体菌中复制。
