巢式 PCR(NEST PCR)技术
先用一对靶序列的外引物扩增以提高模板量 ,然后再用一对内引物扩增以得到特异的 PCR带 ,此为巢式 PCR。若用一条外引物作内引物则称之为半巢式 PCR。为减少巢式 PCR的操作步骤可将外引物设计得比内引物长些 ,且用量较少 ,同时在
第一次 PCR时采用较高的退火温度而第二次采用较低的退火温度 ,这样在第一次 PCR时 ,由于较高退火温度下内引物不能与模板结合 ,故只有外引物扩增产物 ,经过若干次循环 ,待外引物基本消耗尽 ,无需取出第一次PCR产物 ,只需降低退火即可直接进行 PCR扩增。这不仅减少操作步骤 ,同时也降低了交叉污染的机会。这种 PCR称中途进退式。