概念:印迹技术是指将待测核酸分子结合到一定固相支持物上的方法。
southern印迹
概念:将电泳分离的DNA片段转移到一定的固相支持物上的过程。
过程:DNA分子被限制酶切,经琼脂糖凝胶电泳,将DNA片段按照分子量大小分离,然后将含DNA片段的琼脂糖凝胶变性,将其中单链DNA转移到硝酸纤维滤膜或者其他故乡支持物上。而DNA片段的相对位置保持不变。可做下一步杂交反应。
northern印迹
概念:将RNA变性及电泳分离后,将其转移到固相支持物上的过程。
不能用碱变性,防止水解。用甲醛变性。
southern印迹的步骤:
1从组织中提取DNA
2用特定的核酸内切酶酶切
3琼脂糖凝胶电泳
4碱变性
5中和反应
6转膜
7固定
8杂交
9杂交信号检测
northern印迹的步骤:
1从细胞中提取总RNA
2甲醛凝胶变性电泳
3转膜
4固定
5杂交
6杂交信号检测
western印迹的步骤
1蛋白质样品制备
2SDS-PAGE电泳
3转膜
4封闭
5一抗孵育
6二抗孵育
7显色