原理根据细胞色素氧化酵素（cytochrome oxidase）之作用作为细菌组别之区分。
有氧呼吸过程中，氧化酵素（oxidase）对于电子传送系统扮演一重要角色，其可借氧分子将已还原的细胞色素（reduced cytochrome）氧化，产生水或过氧化氢。
好氧菌与部份兼性厌氧菌及微好氧菌均具氧化酵素之作用，本实验有助于区分奈瑟氏菌属（Neisseria）、假单胞杆菌属（Pseudomonas）此二属为氧化酵素阳性(oxidase positive），与肠道杆菌科（Enterobacteriaceae）此科之细菌为氧化酵素阴性（oxidase negative）。
测定细菌产生氧化酵素之能力，可将p-aminodimethylaniline oxalate试剂滴於平板上之菌落，此淡粉红色试剂可作为人工受质，在氧化酵素与游离氧存在下提供电子而被氧化为黑色化合物，使菌落表面呈黑色，表阳性结果。若菌落无颜色变化或呈淡粉红色，表明氧化酵素活性为阴性结果。亦可使用tetramethyl-p-phenylenediamine 2HCl试剂，此试剂为淡蓝色，若菌落呈深蓝紫色，表阳性结果，无颜色变化为阴性结果。
步骤1，将Trypticase soy agar plate以油性笔划分为三区，每区分别标示欲接种之菌名，并编上组别。
2，无菌操作，于各区内分单一划线接种所标示之细菌。
3， 将平板倒放于37℃培养箱，培养24-48小时。
结果滴加2-3滴试剂于测试菌之菌落表面。 观察菌落表面是否在30秒内转变为深蓝紫色，并将结果记录于表格中。 依观察所见，判断各菌产生氧化酵素之能力，并将结果记录于表格中。