胎盼蓝染色

王朝百科·作者佚名  2010-08-15
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胎盼蓝染色是一种最常用的细胞活力的检测方法。

其原理是:细胞损伤或死亡时胎盼蓝染料可以穿过变形的细胞膜,与解体的DNA结合,使其着色。而活细胞能阻止这类染料进入细胞内。借此可以鉴别死细胞和活细胞。除了胎盼蓝常用的染料还有伊红Y和苯胺黑等。

染料配制:4%的胎盼兰母液,称取4g胎盼蓝,加入少量蒸馏水研磨,加双蒸水至100ml,用滤纸过滤,4℃保存。使用时用PBS稀释至0.4%。

操作步骤:a 制备单个细胞悬液,并做适当稀释(六次方个每毫升)。 b 染色:去九滴细胞悬液移至小试管内,加一滴0.4%胎盼蓝溶液,混匀。 c 计数:在3分钟内,用血球计数板分别计数活细胞和死细胞。

结果观察:镜下观察,死细胞被染成浅蓝色,而活细胞拒染。

细胞活力计算:(活细胞数/细胞总数)X100%

注意事项:用胎盼蓝染色时,时间不宜过长,否则部分活细胞也会着色,从而干扰计数。

 
 
 
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