夜行性，是一种动物行为，形容这些生物会于日间休息，却在晚间活跃，正好与我们所熟悉的日行性行为相反。也有介乎两者之间，于黄昏时期出没的生活习性。昼伏夜出的习性是一种生态位分化的表现，不过并不以资源的多寡来决定，而是根据时间本身。另外夜行性也可看成是一种避敌行为，避过有较多猎食者活跃的时间，从而减少被捕猎的机会。
避开日间猛烈的阳光也可以是生物选择夜行性的一大因素，特别是在沙漠生活的生物，就会为了减少散失身体的水份而选择于晚间活动。夜行性也有助生物适应较好的渗透调节[1]。
不少物种一般于日间活动，但在特别的季节或活动时则展现出夜行性。例如不少海鸟及海龟会在繁殖季节时，于晚间到达繁殖场所，以减少它们及子女们被捕猎的机会。
夜行性动动常展现出发达的听觉及嗅觉系统，并有特别用以适应晚间活动时，低光环境下的特别视觉系统。一些动物如猫等，拥有同时适应日间或晚间活动光照度差异大的眼睛，因此日间与晚间时间均可活动；但婴猴科或蝙蝠等则受限于视觉系统而只能于晚间活动。
动物园为了使夜行性动物于游客参观的日间时间内表现出活跃的一面而不是一睡不起，会加装特别的夜间发光装置，而颠倒它们的昼夜节律。
