简介CAS登录号： 11076-19-0
中文名称： 米酵菌酸
英文名称： BONGKREKIC ACID
别名： (r-(r*,s*(e,z,z,e,e,z,e)))--trimethyl;2,4,8,10,14,18,20-docosaheptaenedioicacid,20-(carboxymethyl)-6-methoxy-2,5,17;3-carboxymethyl-17-methoxy-6,18,21-trimethyldocosa-2,4,8,12,14,18,20-heptaen;edioica
产品分子结构：
分 子 式： C28H38O7
分 子 量： 486.6
米酵菌酸的毒性椰毒假单胞菌酵米面亚种
发酵玉米面制品、变质鲜银耳及其它变质淀粉类制品是引起中毒的主要原因，常见的食品有糯米面汤圆、吊浆粑、小米或高粱米面制品、马铃薯粉条、甘薯淀粉等。
毒性：椰毒假单胞菌产生一种叫米酵菌酸的毒素，损害人的肝、脑、肾等器官。米酵菌酸耐热，一般烹调方法不能破坏其毒性，但日晒两日后可去除94%以上变质银耳中的毒素。椰毒假单胞菌酵米面亚种食物中毒多发生在夏、秋季节。潮湿、阴雨的天气，再加上储存不好，椰毒假单胞菌在食物中大量地生长繁殖，吃了这种食物就会发生中毒。
中毒表现：进食后2~24小时出现上腹不适，恶心、呕吐（呕吐为胃内容物，重者呈咖啡色样物），轻微腹泻、头晕、全身无力等。重者可出现皮肤黄染、肝脾肿大、皮下出血、呕血、血尿、少尿、意识不清、烦躁不安、惊厥、抽搐、休克等，体温一般不升高，病死率高达40%~100%。
紧急处理：立即手法或药物催吐，催吐后口服活性炭，并尽快到医院治疗。凡与患者吃过同种食物的人，不论是否发病，一律送往医院观察、治疗。
中毒预防：严禁用浸泡、霉变的玉米制作食品。家庭制备发酵谷类食品时要勤换水，保持卫生，要保证食物无异味产生，最好的预防措施是不制作、不食用酵米面。禁止出售发霉变质的鲜银耳。学会正确辨别银耳的质量。正常干银耳水泡发后，朵形完整、较大，菌片呈白色或微黄，弹性好，无异味；变质银耳不成形、发黏、无弹性，菌片呈深黄至黄褐色，有异臭味。发好的银耳要充分漂洗，食用前要摘除银耳的基底部
米酵菌酸的测定椰毒假单胞菌酵米面亚种产生的一种可以引起食物中毒的毒素。系统命名为：3-羧甲基-17-甲氧基-6，18，21-三甲基-廿二碳-2，4，8，12，14，18-七烯二酸。
1. 薄层色谱测定
（1）原理：样品中的米酵菌酸经提取、净化及浓缩后，根据其在短波紫外光GF254硅胶薄层色谱上显示黑色点的最低检出量测定含量。
（2）仪器
① 层析槽（内径长25cm×宽6cm×高4cm）；
② GF254硅胶薄层（50mm×200mm×0.3mm），自制，经110~115℃活化2~3h，置干燥器中可保存一周；
③ 紫外线灯（波长254nm）；
④ 紫外分光光度计。
（3）试剂
硅胶GF254层析用：
薄层色谱展开剂：石油醚-无水乙醚-冰乙酸（60＋40＋1.5V/V）；
① 米酵菌酸标准液：称取米酵菌酸标准品，用甲醇配制成每毫升含有米酵菌酸20ｕg作测定用。置于4℃冰箱中避光保存；
② 甲醇：分析纯；
③ 冰乙酸：分析纯；
④ 石油醚：分析纯，沸程30~60℃；
⑤ 无水乙醚：分析纯；
⑥ 三氯甲烷：分析纯；
⑦ 85％磷酸：分析纯；
⑧ 4％碳酸氢钠水溶液；
⑨ 6mol/L盐酸：分析纯。
（4）米酵菌酸的提取：酵米面、干银耳样品经粉碎过40目筛后，称取20g，置具塞锥形瓶中，加入甲醇20mL，于室温中避光浸泡1h，然后再加入三氯甲烷80mL和85％磷酸0.2mL；称取10g经剪碎、磨细及混匀后的鲜银耳，加入甲醇16mL于室温中避光浸泡1h，然后再加入三氯甲烷64mL和85％磷酸0.16mL，振荡30min，过滤，取滤液40~50mL。
将以上滤液移入分液漏斗中，加入与滤液体积相同的4％碳酸氢钠水溶液，振摇2min，静置分层，用带自动控制球吸管吸出上层于另一分液漏斗中，再用4％碳酸氢钠水溶液重复提取两次，每次10mL，轻摇，静置，将三次碳酸氢钠水层合并，加入三氯甲烷25mL，振摇2min，静置分层后弃去三氯甲烷层。于分液漏斗中慢慢滴入6mol/L盐酸调该溶液pH至2~3，加入石油醚（沸程30~60℃）40~50mL，振摇3min，静置分层，吸出石油醚层于梨形瓶中，再重复用石油醚30mL和20mL各提取一次，将石油醚层并入同一瓶中，于40℃水浴中减压吹气浓缩至干，用甲醇移至带1mL刻度的浓缩管中，于40℃用减压法浓缩至0.2mL以下，并用少许甲醇洗管壁，继续浓缩至干，加甲醇0.125mL，将干物质溶解，混匀，作为样液以供薄层色谱测定用。
（2）薄层色谱测定
用微量注射器滴加20μ g/mL标准液8ｕL与10ｕL两个点，以及两个样液点，每点10ｕL（鲜银耳样品滴加20μL）。用展开剂展开16cm，取出挥干。在254nm紫外灯光下观察结果如下：①标准点应出现黑色点；②如样点在标准点相应位置上未出现黑色点，则样品中米酵菌酸的含量在测定方法灵敏度0.25ｕg/g以下；如在相应位置上有黑色点，而另一点中样液与标准点重叠，则为阳性。根据样液黑色点的强度估计减少滴加微升数，或经稀释后再滴入不同微升数，直至样液与标准色点的强度与面积一致为止。米酵菌酸的比移值为0.22。
（6）计算公式
………（1）
式中：0.2――米酵菌酸的最低检出量，ｕg；
V1――加入甲醇溶解的体积，mL；
V2――出现最低检出量时滴加样液的体积，mL；
D――样液的总稀释倍数；
M――甲醇溶解时相当样品的质量，g。
（7）确证试验：对含量高的样品可以进一步做确证试验。将剩余的阳性样液与空白甲醇液分别经薄层分离后，刮下并收集与米酵菌酸标准相应的色谱带与空白处硅酸。各加甲醇4mL，于室温中浸泡1~2h，混匀，离心，吸出上清液，以空白硅胶甲醇洗脱液作对照，用紫外分光光度计测定，应在267nm与236nm处有米酵菌酸的两个最高吸收峰。
2. 高效液相色谱测定法
（1）原理：样品中的米酵菌酸经提取、净化及浓缩后，根据在高效液相色谱上的出峰面积测定含量。
（2）仪器
① 高效液相色谱仪；
② 20μL样品环；
③ 分光光度检定器，调波长至267nm；
④ 求积仪；
⑤ 防护柱4.6mmID×5cm，内装C-18硅胶10μm；
⑥ 分析柱Altex UltrasphereTM-ODS5ｕm，4.6mmID×25cm。
（3）试剂
① 高效液相色谱洗脱剂：甲醇-水-冰乙酸[75＋27＋1.7（V/V）]；在配制前，所用试剂及水均需分别重蒸馏。
② 米酵菌酸标准液：称取米酵菌酸标准品，用甲醇配制成每毫升含有米酵菌酸20μg作测定用。置于4℃冰箱中避光保存；
③ 甲醇：分析纯；
④ 冰乙酸：分析纯；
⑤ 石油醚：分析纯，沸程30~60℃；
⑥ 无水乙醚：分析纯；
⑦ 三氯甲烷：分析纯；
⑧ 85％磷酸：分析纯；
⑨ 4％碳酸氢钠水溶液；
⑩ 6mol/L盐酸：分析纯。
（4）米酵菌酸的提取
同薄层色谱法，但最后用甲醇转移时，直接于瓶内加入甲醇0.5mL，将干物质溶解，混匀。取出上清液经离心后，置小试管中，作为样液，供高效液相色谱测定用。
（5）高效液相色谱测定
高效液相色谱操作条件：流速1.1mL/min，纸速0.5cm/min，检定器灵敏度为将10μg/mL标准液20μL调至满刻度的70％~90％。在做高效液相色谱时，首先用洗脱液平衡分析柱，从进样口分别进入不同浓度的标准液与样液各20μL。在米酵菌酸标准峰面积的直线范围内，将样液与标准的峰面积相比，以求出样品中米酵菌酸的含量。米酵菌酸的保留时间为17min。
（6）计算公式
……（2）
式中：C――米酵菌酸标准溶液的浓度，ｕg/mL；
A――样液的峰面积；
S――米酵菌酸标准溶液的峰面积；
V――加入甲醇溶解的体积，mL；
D――样液的总稀释倍数,屏风；
M――甲醇溶解时相当样品的重量，g。
（7）确证：如阳性样品还需用薄层色谱法中样液与标准点重叠的方法确证。
