辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP)
辣根过氧化物酶(horse radish peroxidase,简称HRP,EC.1.11.1.7)是植物中研究得最深入的一种过氧化物酶,早在20世纪30年代就有人着手从辣根中分离此酶,以后又制备出结晶。本实验是以辣根为原料,经过水的抽提,硫酸铵和丙酮分级分离,再经锌离子纯化,透析除盐,冰冻干燥,便可得到高纯度的辣根过氧化物酶。
辣根过氧化物酶是一种含亚铁血红素的蛋白质,HRP广泛分布于植物界,它是由无色的酶蛋白和棕色的铁卟啉结合而成的糖蛋白,糖含量18%。HRP由多个同功酶组成,Mr在40000左右,等电点7.2。溶于水,溶解度为5%(W/V),溶液呈棕红色,透明。酶催化的最适PH因供氢体不同而稍有差异,但多在pH5左右。酶溶于水和58%以下的硫酸铵溶液。HRP可溶于0.58饱和度以下的硫酸铵溶液,而0.62饱和度以上则不溶。该酶最适pH7.0(对愈创木酚为氢给体而言)。在室温下,HRP几周内稳定,加热到63℃,在15min内稳定。氧化还原电势很低,pH6.08时,E ' 0 =-0.2070V,pH为7.71时,E′0 =-0.2787V。HRP的辅基和酶蛋白最大吸收光谱分别为403nm和275nm,一般以OD403nm/OD275nm的比值RZ(德文Reinheit Zahl)表示酶的纯度。
酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否,因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体,它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体,其次要有良好的制备方法。目前,高质量的酶(如辣根过氧化物酶,简称HRP)国内已有商品供应。高质量的抗体则可通过提取纯化而获得。在制备方法上,宜选用产率高、不影响结合物的活性和不混杂干扰性物质且操作简便易行的方法。
假设参考通道(Hypothetical Reference Path, HRP )
用户对通信系统的要求是多种多样的。例如,通信距离可以有远有近,传送的信息可以是语言、图像或数据,每个中继段可以分出或插入信息,也可以直接转接,话路噪声有大有小等等。这样,很难对不同通信线路规定一个统一的质量标准。为了比较各种通信设备与通信线路的性能,可以预先规定一条假设的通信线路,并假定把通信设备安装在这条线路上,在这种条件下去考察该线路的传输质量。通常就把这条通信线路称为假设参考通道。而传输质量标准都是针对一定的假设参考通道规定的。