母牛配种后，尽早进行妊娠诊断，可以防止母牛空怀，提高繁殖率。经过妊娠检查，对没有受胎的母牛，应及时进行配种；对已受胎的母牛，须加强饲养管理，做好保胎工作。
母牛的妊娠诊断主要是根据妊娠期间的体内外变化及行为的改变而进行的。常用的有以下几种方法。
(一)外部观察法 母牛怀孕后，不再出现发情，随着妊娠期的进展，食欲和饮水量增加，故牛的营养状况改善，毛色润泽，膘情变好。但是，高产奶牛由于产奶的营养消耗，在怀孕中期、产奶高峰期后，往往膘情较差。母牛怀孕后，行为上发生明显的改变，如性情变得温顺、行动迟缓，常躲避角斗或追逐，放牧或驱赶运动时，常落在牛群之后。怀孕中后期腹围增大，右侧腹壁突出，可触到或看到胎动。头胎牛乳房发育加快，妊娠4—5个月后乳房体积明显地增大，而经产牛通常在分娩前1个月左右，才有显著的乳房增大和水肿。外部观察法虽然简单易行，但一般不能进行早期妊娠诊断。
(二)直肠检查法 这是母牛早期妊娠诊断最常用的方法之一，有经验的人员，可以在母牛妊娠40—60天左右判断其妊娠与否，准确率可达90％以上。
直肠检查是用手隔着直肠触摸妊娠子宫、胎儿和胎膜的变化情况，并由此判断牛的妊娠。该法特别是对于牛早期的妊娠诊断，比较准确可靠，应用也较普遍。但像牛的发情鉴定一样，使用该法进行妊娠鉴定需要丰富的实践经验。
早期的直肠检查，主要根据子宫角和卵巢黄体的变化进行判断。有孕体的一侧子宫角一般较另一侧略大，且柔软；同侧卵巢也较他侧为大，且卵巢上的黄体质软而突出于卵巢表面。后期的直肠妊娠检查主要是根据子宫中动脉特异脉搏等的变化和胎儿的存在进行判断。
直肠检查进行妊娠诊断的准备与牛的人工授精相似，可参阅前述有关内容。但要注意的是，早期的胚胎比较脆弱，胎儿和子宫的联系也正在建立之中，故操作时，必须细心、轻柔，避免卤莽而造成怀孕母牛的流产。
(三)阴道检查法 该法是根据阴道粘膜色泽、粘液分泌及子宫颈状态等确定母牛是否妊娠。阴道检查法常作为母牛妊娠诊断的辅助方法。但由于检查时，需要使用阴道开张器，不小心或因牛左右活动，可能损伤牛的生殖道。而且，该法也不如直肠检查准确，故现在在生产上，用得比较少。
正常情况下，母牛怀孕3周后，阴道粘膜由未孕时的淡粉红色变为苍白色，没有光泽，表面干燥，同时阴道收缩变紧。阴道粘液的变化较为明显：怀孕1．5—2个月，子宫颈口附近有粘稠粘液，量很少，3-4个月后量增多变为浓稠、灰白或灰黄，形如浆糊。妊娠母牛的子宫颈紧缩关闭，有浆糊状的粘液块堵塞于子宫颈口称为子宫颈塞(栓)，可以保护胎儿免遭外界病菌的浸入。子宫栓在分娩或流产前溶解，并呈线状流出体外。
除上述妊娠检查方法外，还可以根据母牛巩膜表面有无明显血管暴露或血管粗细、颜色变化、根据血浆或乳中孕酮含量的变化、以及利用3％硫酸铜溶液或牛奶酒精反应实验等方法进行母牛的妊娠诊断。激素反应法是利用妊娠母体由于体内高孕酮水平而对适量的外源性雌激素的不敏感性，判断牛是否妊娠。牛配种后18-20天，肌肉注射合成雌激素(乙雌酚等)2-3mg，注射后5天内不发情可判为妊娠。此法比较简单，据称准确率在80％以上。一般情况下，未孕母牛孕酮含量较低，怀孕母牛则上升，孕酮测定法即是利用妊娠母牛孕酮分泌的增加而判断妊娠，但需要一定的实验室条件，且孕酮的水平与采样的时间及个体差异较大，故可用于研究需要，而在生产上推广的价值不大。牛妊娠鉴定的其他方法在生产上虽有一定的利用，但其准确性仍有争议。