PfuDNA聚合酶（Pfu DNA polymerase），又称Pfu聚合酶，或Pfu酶，是在嗜热的古核生物火球菌属内发现的，一类能在活体内进行DNA复制的酶。体外实验中，在聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）中，使用Pfu聚合酶可以快速，高保真的扩增DNA片段。
Pfu聚合酶的校正作用与其它在PCR反应中使用的聚合酶相比，Pfu聚合酶有着出色的热稳定性，以及特有的“校正作用”。与TaqDNA聚合酶不同，PfuDNA聚合酶具有3'-5'外切酶的即时校正活性，可以即时的识别并切除错配核苷酸。因此，使用PfuDNA聚合酶进行PCR反应，比使用Taq聚合酶有较低的错配突变几率，保真性更高。Pfu聚合酶正逐渐取代Taq聚合酶，成为使用最广的PCR工具。
商业化的Pfu聚合酶试剂，其出错率是100万到130万个碱基对出现一个错配，使用PCR每扩增1kb的DNA片段会产生2.6%的突变产物。但缺点是，Pfu聚合酶的效率较低。一般来说，在72° C扩增1kb的DNA时，每个循环需要1到2分钟。而且使用Pfu聚合酶进行PCR反应，会产生钝性末端的PCR产物。
Pfu聚合酶常常用于保真性要求较高的DNA合成中。有报道说，Pfu聚合酶与Taq聚合酶联合使用，既能达到Pfu聚合酶的高保真性，又能发挥Taq聚合酶的快速聚合活性。