又叫双层琼脂平板法
先在培养皿中倒入底层固体培养基，凝固后再倒入含有宿主细菌和一定稀释度噬菌体的半固体培养基。培养一段时间后，计算噬菌斑的数量。
方法:双层琼脂平板法
1 倒下层琼脂
融化下层培养基，倒平板（约10mL/皿）待用。
2 倒上层琼脂
融化上层培养基，待融化的上层培养基冷却至50℃左右时，每管中加入敏感指示菌 (大肠杆菌) 菌液0.2mL，待检样品液或上述噬菌体增殖液0.2～0.5mL，混合后立即倒入上层平板铺平。
3 恒温培养
30℃恒温培养6～12h观察结果。
4 观察结果
如有噬菌体，则在双层培养基的上层出现透亮无菌圆形空斑——¬¬¬¬噬菌斑