吖啶酯是一类可用作化学发光标记物的化学物质。
如果吖啶环上的取代基能与吖啶环上的C-9 和H2O2(过氧化氢)形成不稳定的二氧乙烷(此二氧乙烷可迅速分解为CO2 和电子激发态的N - 甲基吖啶酮,当回到基态时发出光子),则这类取代吖啶化合物可做为化学发光标记物。
根据取代基的不同,常用作化学发光标记物的吖啶取代物分为两类:吖啶酯和吖啶磺酰胺。它们的结构中都有共同的吖啶环。 它们的发光机理相同:在碱性H2O2 溶液中, 分子受到过氧化氢离子进攻时, 生成不稳定的二氧乙烷, 此二氧乙烷分解为CO2 和电子激发态的N - 甲基吖啶酮, 当其回到基态时发出最大发射波长为430nm 的光子。这类化合物从发光的机理来说特点是: ①发光反应中在形成电子激发态中间体之前, 联结于吖啶环上的不发光的取代基部分从吖啶环上脱离开来, 即未发光部分与发光部分分离, 因而其发光效率基本不受取代基结构的影响。②吖啶酯或吖啶磺酰胺类化合物化学发光不需要催化剂, 在有H2O2 的稀碱性溶液中即能发光。因此应用于化学发光检测具有许多优越性。优点主要有:①背景发光低,信噪比高;②发光反应 干扰因素少;③光释放快速集中、发光效率高、发光强度大;④ 易于与蛋白质联结且联结后光子产率不减少;⑤标记物稳定( 在2 - 8 ℃下可保存数月之久)。因此吖啶酯或吖啶磺酰胺是一类非常有效、非常好的化学发光标记物。
这类化合物的发光为闪光型,加入发光启动试剂后0. 4s 左右发射光强度达到最大, 半衰期为0. 9s 左右。
吖啶酯或吖啶磺酰胺类化合物应用于化学发光免疫分析(CLIA),通常采用的体系是Acridinium ester/ H2O2 系统。 即用吖啶酯或吖啶磺酰胺标记抗体或抗原, 用HNO3+ H2O2 和NaOH 作发光启动试剂。有些在发光启动试剂中加入Triton X - 100 , CTAC , Tween - 20 等表面活性剂以增强发光。
常用的吖啶酯和吖啶酰胺类化合物结构以及发光反应步骤参见附图。