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品牌:翟朝阳
基本信息
·出版社:四川大学出版社
·页码:178 页码
·出版日:2004年
·ISBN:7561428219
·条码:9787561428214
·版次:2004年6月第1版
·装帧:平装
·开本:16开 16开
内容简介
为了适应高等院校教育改革,新的四川大学建立了医学生物分子实验室,并将原来免疫学、生物化学和分子生物学的实验课程纳入这个实验室的教学范畴。这本教材就是在这个背景下产生的。
这本教材的内容,除包括了原有的免疫学、生物化学和分子生物学三门课程的主要实验外,还设计了一些综合性实验,其目的不仅要让学习者通过这样的实验掌握较全面的实验技能,而且要使他们能够将各学科的知识贯通起来综合运用。由于这样的实验需要连续的操作,对学习者的意志、耐力、信心也将是一个考验。希望通过这样的实验课学习,对学习者素质的提高有所帮助。
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书评
为了适应高等院校教育改革,新的四川大学建立了医学生物分子实验室,并将原来免疫学、生物化学和分子生物学的实验课程纳入这个实验室的教学范畴。这本教材就是在这个背景下产生的。
这本教材的内容,除包括了原有的免疫学、生物化学和分子生物学三门课程的主要实验外,还设计了一些综合性实验,其目的不仅要让学习者通过这样的实验掌握较全面的实验技能,而且要使他们能够将各学科的知识贯通起来综合运用。由于这样的实验需要连续的操作,对学习者的意志、耐力、信心也将是一个考验。希望通过这样的实验课学习,对学习者素质的提高有所帮助。
我国的教育体制与国外有所不同,但在培养学习者成才这个目的上应当是相同的。怎样达到这个目的,对教育工作者来说是需要探索的。编写这本教材,实际上就是要吸取前人的精华而弥补他们的不足。我们愿意尽力把这项工作做好。尽管愿望很好,但本教材仍可能存在新的问题。我们诚恳地虚心地欢迎使用者和前辈们、同行们提出宝贵的意见,以便我们今后修正,把大学的生物分子实验教学做得更好。
这本教材是为大学本科生编写的,也适合作为研究生或教师的参考用书。
编者
2004春季
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为了适应高等院校教育改革,新的四川大学建立了医学生物分子实验室,并将原来免疫学、生物化学和分子生物学的实验课程纳入这个实验室的教学范畴。这本教材就是在这个背景下产生的。
这本教材的内容,除包括了原有的免疫学、生物化学和分子生物学三门课程的主要实验外,还设计了一些综合性实验,其目的不仅要让学习者通过这样的实验掌握较全面的实验技能,而且要使他们能够将各学科的知识贯通起来综合运用。由于这样的实验需要连续的操作,对学习者的意志、耐力、信心也将是一个考验。希望通过这样的实验课学习,对学习者素质的提高有所帮助。
目录
实验1 凝集反应
实验2 沉淀反应
实验3 免疫扩散和免疫电泳
实验4 补体结合实验
实验5 溶血实验
实验6 E玫瑰花环实验
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文摘
书摘
质粒DNA的提取
【原理】
质粒DNA是细胞内独立存在的分子,为双链环状DNA,无蛋白质,主要存在于原核细胞和植物细胞。质粒DNA在细胞内游离于染色体外,不与染色体DNA发生整合,并以多拷贝形式存在。由于质粒DNA能在细胞内独立复制,不依赖细胞分裂和染色体的控制,所以在分子生物学中被广泛利用来作为携带外源DNA的载体,即利用分子克隆技术把外源DNA片段或基因重组到质粒DNA分子上,然后通过转化宿主细胞,获得带有外源基因或DNA片段的克隆(无性繁殖系)。靠着宿主细胞的快速繁殖和质粒本身在细胞内的复制,可以获得大量拷贝的克隆的外源基因或DN.A片段,还可以使外源基因在宿主细胞内表达出蛋白质。因此,根据质粒作为DNA载体的两个目的,可以将质粒载体分为两类:一是单纯用来克隆和扩增外源DNA片段或基因的质粒DNA分子,称之为克隆载体(克隆质粒);另一类是在克隆载体的基础上,在质粒DNA分子多克隆位点上游的适当位置装有蛋白质表达调控元件(一般是启动子结构)的质粒,称之为表达载体(表达质粒)。根据表达调控元件的性质(真核或原核),表达质粒又进一步分为真核表达质粒或原核表达质粒。
作为载体分子,在克隆中所用的质粒应当具有几个必要的条件:
(1)必须具有能在细胞内复制的复制起点,才能在宿主细胞内进行自主复制;
(2)必须具有可以与外源DNA连接的多种限制性核酸内切酶的单一的酶切位点,这样才能使外源DNA与载体分子被完成切割和连接,形成重组的质粒DNA分子;
(3)载体分子上应当具有可进行筛选的标记片段,如抗生素抗性基因、酶基因、营养缺陷基因等;
(4)质粒载体的分子不应过大,这样才能连接一定大小的外源DNA片段。
对克隆载体的要求是能够通过复制获得大量的外源DNA拷贝,因此这种载体应能在适当的宿主细胞内有更多的拷贝数;对表达载体来说,需要在多克隆插入位点的上游装备与宿主细胞相适应的启动子、前导序列、加尾信号、增强子等。有的表达载体还加有信号肽基因或融合蛋白基因片段,以利于表达检测或表达产物的提纯。
质粒DNA的提取是分子生物学的基本操作技术,是分子生物学技术的一个基础。制备质粒DNA分子有不同的目的。为了获得纯的质粒DNA,以便进行分子克隆、蛋白质表达产物的提取和纯化或者用来转染供化细胞时,需要将带有质粒的细菌进行大
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