常压蒸汽灭菌法通过热蒸汽使蛋白质变性而杀灭微生物的方法。湿热穿透力强，灭菌效果较干热好。
①煮沸或流通蒸汽灭菌：常压下沸水和蒸汽的温度是100℃，一般处理30~60min可杀死细菌繁殖体，但不能完全杀灭芽孢。此法适用于不能高压蒸汽灭菌的物品。
②低温间隙灭菌（巴斯德灭菌法）：将物品先用60~80℃加热（或煮沸）1h，然后置20~25
℃保存24h（或常温过夜），使其中残存的芽孢萌发成繁殖体，再用以上条件灭菌，如此反复三次。本法适用于不耐高温或高温下易变质的物品，但很费时。
操作将灭菌物置于常压灭菌锅内，以自然压力的蒸汽进行灭菌的方法。常压灭菌灶的建造方法根据各地习惯而异。常压灭菌的时间通常以见冒大气（100℃）开始计算，一般维持8～10小时。灭菌时注意不要将灭菌物排得过密，以保证灭菌锅内的蒸汽流通。开始要求以旺火猛攻，使灭菌灶内的温度尽快上升至100℃，中途不能停火，经常补充热水以防蒸干。此法的优点是建灶成本低、容量大，但灭菌时间长、能源消耗量大。
常压蒸汽间歇灭菌将待灭菌的培养基或物品装入常压灭菌器内，加热至100℃大量产生气体时,维持30—60min,每天灭菌一次,连续灭菌三天.每次蒸煮间隙里,培养基或物品应放在室温(20--30℃)条件下培养,第一次蒸煮杀死微生物的营养体,芽孢则在培养过程中萌发成营养体;第二次蒸煮即可杀死.经过而次培养,三次反复蒸煮,即可达到完全灭菌。
