克隆常用试剂溶液配方LB液体培养基:baco-tryptone 10g bacto-yeast extract 5g NaCl 10g 搅拌完全溶解,用氢氧化钠10M调pH7.0,定溶1L,灭菌。 Hs?e0Z=N LB固体培养基:LB液体培养基临高压灭菌前加入15g琼脂。 ^D^4 YJz 氨苄青霉素:贮存液50mg/ml(水), 过滤除菌,避光保存-20oC,用时取50微升加入50毫升培养基。 LMi:%i%\ 0.5M EDTA(pH8.0):160毫升h2O EDTA-Na-2h2O(37.22g),磁力搅拌,用氢氧化钠(约4克颗粒)调pH8.0,定溶至200ml。分装高压灭菌。 ~ ~uAc_ 1M Tris.HCl(pH 8.0):160毫升h2O 24.22g Tris碱,加入浓HCl 8.4毫升后冷却至室温,调pH8.0,定溶至200ml。分装高压灭菌。 CQel3Jtt. 1.5M Tris.HCl(pH 8.8):160毫升h2O 36.33g Tris碱,加入浓HCl ?毫升后冷却至室温,调pH8.8,定溶至200ml。分装高压灭菌。 }X GEX:1K 1M Tris.HCl(pH 6.8):160毫升h2O 24.22g Tris碱,加入浓HCl ?毫升后冷却至室温,调pH6.8,定溶至200ml。分装高压灭菌。 m)V/L]4 10%SDS:90毫升h2O溶解10gSDS(加热68oC助溶),加入几滴浓HCl调pH7.2,定溶至100ml,分装无须灭菌 m9U"[Huv1E 提取质粒溶液1:200毫升 yc|VJ2R* 无水葡萄糖1.8 g GgaTn!mJt 1M Tris.HCl(pH 8.0) 5ml 1ygpp0IGJ 0.5M EDTA(pH 8.0) 4ml e><5Pr) 定溶至200ml,灭菌,4oC保存 *6xgctk 提取质粒溶液2(现用现配): olLfko4$*V 10%SDS 1ml 10M NaOH 200 微升 水 8.8 ml cb5,P~/q 提取质粒溶液3:200毫升 =^ T\Xs;GK KAc 58.884 g 冰乙酸 23 ml s1?[7yC 定溶至200ml,灭菌,4oC保存 1s1=rZ! TE:1M Tris.HCl(PH8.0) 1ml(灭菌) 0.5M EDTA(PH8.0)200 微升(灭菌) r-,e;o>9 定溶100ml g/13~UM\ IPTG:8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后定溶至10ml,0.22um滤器过滤除菌,分装,-20 oC保存。 Z $J#| X-gal:用二甲基甲酰胺溶解X-gal配制成20mg/ml的贮存液,保存时防光破坏,-20 oC保存,无须过滤除菌。 <3,<\ub 氨苄青霉素(Amp母液):50mg/ml。终浓度:50ug/ml。 .$@R{>%U 50当然,看http://wenwen.buhen.com/a/914