噬菌体展示:通用实验指南
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作者： （美）克拉克森，（美）洛曼编；马岚等译
出 版 社：
出版时间： 2008-7-1字数： 397000版次： 1页数： 247印刷时间： 2008/07/01开本： 16开印次： 1纸张： 胶版纸I S B N ： 9787122027634包装： 平装编辑推荐
如何计划一个成功的噬菌体展示和实验？噬菌体展示实验所需设备和试剂列表，实验步骤，构建噬菌体库，进行亲和筛选，分析所筛选克隆亲和性噬菌体展示常规常用。
内容简介
噬菌体展示技术已成为发展新特性多肽和改造已有多肽性质的强大工具。虽然此项技术已被广泛使用，但其仍然存在技术上的挑战，同时其新的应用和步骤也层出不穷。
本书是一本与时俱进、通俗易懂且兼容并包的噬菌体实验设计和操作指南，对于那些在生物学研究和药物开发中使用该项技术的读者，具有很高的参考价值。
本书的目的是为了使研究工作者能够设计和完成噬菌体课题中所涵盖的各方面工作——从实验策略的设计、噬茵体库的构建到筛选的实施和结果的分析。本书提供了如下内容：
如何计划一个成功的噬菌体展示实验？
实验设备和试剂列表
实验步骤构建噬菌体库、进行亲和筛选、分析所筛选克隆亲和性
噬菌体展示常规应用 包括从肽库中筛选配体、构建和使用噬菌体抗体库以及使用cDNA库展示进行表达克隆
本书的一大特色：
在各章节中进行广泛的交叉引用 使得读者能够跳出所介绍的具体实验步骤的限制，而对实验步骤加以改造，使之能为自己感兴趣的蛋白或筛选提供系统的服务。
目录
第l章 噬菌体生物学及噬菌体展示简介
1.1简介
1.2丝状噬菌体生物学
1.2.1简介
1.2.2噬菌体颗粒的结构
1.2.3感染
1.2.4复制
1.2.5基因和基因表达
1.2.6 噬菌体装配生理学
1.2.7 噬菌体装配机制
1.3噬菌体展示所使用的衣壳蛋白
1.3.1pⅧ蛋白
1.3.2pⅢ蛋白
1.4着手一个噬菌体展示项目
1.4.1展示的可行性
1.4.2 筮菌体载体还是噬菌粒载体？
1.4.3多价展示还是单价展示？
1.4.4辅助噬菌体
1.4.5 篮菌体制备及定量的一般实验方案
1.5一个噬菌体展示项目的一般规则
1.5.1一个文库的生成
1.5.2筛选
1.5.3克隆的分析
1.6常见的问题
1.6.1文库的质量
1.6.2表达的编辑
1.6.3过度筛选
1.7作为替代的展示系统
1.8 筮菌体展示文库及试剂盒的商业来源
参考文献
第2章使用寡核苷酸定向诱变构建噬茵体展示文库
2.1简介
2.2文库设计的考虑
2.2.1点突变
2.2.2简并密码子的设计
2.2.3理论的和实际的多样性
2.3定点诱变
2.3.1定点诱变与盒式诱变的比较
2.3.2寡核苷酸定向诱变的化学和生物学
2.3.3无活性模板的构建
2.4文库的构建和保存
2.4.1单链DNA模板的制备
2.4.2异源双链CCC—dsDNA的体外合成
2.4.3大肠杆菌的电转化和文库噬菌体的制备
2.4.4文库的保存和再感染
2.5生物试剂
参考文献
第3章体外DNA重组
3.1导言
3.2体外DNA重组的本底
3.2.1体外DNA重组在定向进化中的使用
3.2.2体外DNA重组的应用
3.2.3重组统计学
3.3体外DNA重组的方法
3.3.1Stemmer法
3.3.2 来自大肠杆菌的内切核酸酶V的DNA的随机片段化
3.3.3随机引物重组
3.3.4交错延伸程序
3.3.5体外异源双链的形成和体内修复（异源双链重组）
3.3.6重组方法的选择
3.3.7本底的消除
3.3.8技术要点
参考文献
第4章 为提高蛋白及多肽的亲和性及特异性的噬菌体筛选策略
4.1简介
4.2载体的考虑
4.2.1单价和多价噬菌体展示
4.2.2确保展示的成功
4.2.3通过噬菌粒载体的蛋白质表达
4.2.4载体的构建及噬菌粒的制备
4.3文库的设计
4.3.1硬随机突变
4.3.2软随机突变
4.4靶标的呈递
……
第5章用噬菌体ELISA快速鉴定噬菌体展示蛋白的结合亲和性
第6章使用重组肽库为受体识别新配体
第7章底物噬菌体展示
第8章从噬菌体展示文库中对稳定折叠的蛋白质及蛋白质结构域进行的基于蛋白酶的筛选
第9章锌指结构与其他核酸结合性基序的噬菌体展示
第10章噬菌体展示文库在体内及体外的筛选
第11章利用血清筛选噬菌体文库
第12章使用展示在噬菌体上的cDNA文库进行相互作用克隆
第13章噬菌体抗体文库
第14章噬菌体抗体的亲和力成熟
附录普通供应商
书摘插图
第l章 噬菌体生物学及噬菌体展示简介
1.1 简介
在丝状噬菌体上展示多肽和蛋白质——噬菌体展示技术——是一种能够将所需性质的多肽从含有大量变异体的集落中提取出来的体外筛选技术。通过将所感兴趣的基因融合到噬菌体衣壳蛋白基因中，可以使噬菌体颗粒展示该基因编码的蛋白，同时噬菌体颗粒中包含了该基因，从而提供了表型与基因型的直接联系。这种联系使得噬菌体库可以经过一轮筛选步骤（例如亲和层析），然后通过测序鉴定所得到的克隆，并可以通过再扩增以进行更多轮的筛选。自从mith[1]首次阐述该方法以来，噬菌体展示技术已经发展成为了一种发现新特性多肽以及改变已有多肽性质的强大工具（见参考文献〔2～5〕的综述部分）。
丝状噬菌体在用作克隆载体尤其用于展示载体的很多方面都非常理想：丝状噬菌体的基因组比较小并且允许插入外源片段到非必要区域中；库的克隆和扩增也因为能够同时分离单链和双链DNA和可利用简单的基于质粒的载体而易于进行；衣壳蛋白能够在被修改的同时保留感染能力；噬菌体可以被富集到较高滴度，因为其增殖不会破坏宿主细胞；噬菌体颗粒在可能的筛选条件下的较宽范围内能够保持稳定。
本章节的意图是为在开始噬菌体展示实验项目的提供所需的一些基本知识。在最开始的部分中，主要是总结性地介绍噬菌体地生活周期、遗传学以及结构生物学，其中重点介绍的是与噬菌体展示相关的方面。接下来，我们将介绍在接触一个新的噬菌体展示实验项目时所需要考虑的一些基本问题，包括展示形式的选择，实验设计和通常遇到的困难。最后，为了使研究者能够有预先的准备，我们提供了噬菌体载体、试剂盒以及其他展示系统的商品来源。我们也提供了包含详细实验步骤的章节间的前后对照。
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