医学细胞生物学与医学遗传学实验教程
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作者： 肖军军主编
出 版 社： 北京大学医学出版社
出版时间： 2008-5-1字数： 160000版次： 1页数： 93印刷时间： 2008/05/01开本： 16开印次： 1纸张： 胶版纸I S B N ： 9787811165555包装： 平装内容简介
21世纪被认为是生命科学的世纪。医学细胞生物学与遗传学作为生命科学的微观世界的重要基础学科，近年发展非常迅速，广泛地影响着基础医学与临床医学，已成为现代医学教育中的重要课程。掌握这两门学科实验的方法与技术对于从事基础医学和临床医学工作是十分必要的。 本教材是为《医学细胞生物学》和《医学遗传学》理论课配套的实验教材，实验包括：基本实验与综合实验两个部分。
目录
基本实验
实验一 细胞遗传学实验技术
实验1.1 小鼠骨髓染色体标本制备
实验1.2 正常人非显带染色体的核型分析
实验1.3 人类染色体G显带核型分析
实验二 分子遗传学实验技术
实验2.1 人类基因组DNA提取
实验2.2 亨廷顿病的基因诊断
实验三 生化遗传学实验技术
实验3.1 溶酶体酶贮积病的生化检测
实验四 细胞生物学实验技术
实验4.1 细胞的原代培养
实验4.2 细胞的传代培养
实验4.3 各种光学显微镜与临时制片方法
实验4.4 荧光显微镜技术
实验4.5 吖啶橙荧光染色法
实验4.6 细胞化学染色（Feulgen反应显示DNA）
实验4.7 细胞骨架——微丝的显示与观察
实验4.8 电子显微镜术及电子显微镜生物样品制备
综合实验
实验一 遗传咨询
实验二 遗传病分析及风险评估
实验三 人类正常性状的遗传学分析
实验四 人类遗传病分析（观看光盘）
实验五 人类皮纹分析
实验六 氨基酸分析（氨基酸分析仪）
实验七 单细胞凝胶电泳
实验八 磷酸钙介导的绿色荧光蛋白细胞转染技术
融合实验
实验一 人体外周血淋巴细胞培养及染色体标本制备
实验二 细胞分离
书摘插图
实验一 细胞遗传学实验技术
实验1.1小鼠骨髓染色体标本制备
【实验目的】
掌握实验动物骨髓染色体标本的一般制备方法（直接法）。了解小鼠染色体的形态特征及其数目。
【实验原理】
动物骨髓细胞具有旺盛的分裂增殖能力。在骨髓细胞中处于分裂相的细胞数目较多。为了有效积累更多的有丝分裂中期细胞，可在收集骨髓细胞前用秋水仙素对其进行处理，其作用是抑制细胞分裂过程中纺锤丝的形成，使细胞有丝分裂停止于中期，可以积累中期分裂相细胞，以便于染色体标本的制备。
制备过程中用KCl低渗处理，可使细胞体积膨大，染色体分散。低渗后，需要用固定液固定染色体。高位滴片和吹散滴液，可使染色体进一步分散。用预冷的载玻片滴片后，迅速过火，可使染色体进一步扩散和固定，以便于制片和观察分析。
通过制备小鼠骨髓染色体标本，可以评价毒性物质对动物细胞染色体的影响。本法可应用于环境致突剂的检测，具有简单、直接、利于掌握的特点，普通实验室均可应用。因此本法是检测有害物质对机体遗传物质损伤的常用实验方法之一。
【实验材料】
1.试剂 甲醇、冰醋酸、0.075mol／LKCl、乙醇、0.04％秋水仙素、Giemsa染液。
2.器械（仪器） 离心机、普通天平、镊子、解剖剪子、搪瓷盘、搪瓷盆、纱布、试管架、片盘、10ml量简、1ml注射器、5ml注射器、滴管、刻度离心管、橡皮吸头、50ml烧杯、预冷的载玻片（冰片）、酒精灯。
3.动物（或标本） 小白鼠（体重约为20g）。
【实验步骤】
1.取材小鼠股骨骨髓细胞
取材前4小时于小鼠腹腔内注入0.04％的秋水仙素（0.1ml／10g）以积累中期分裂相。断颈髓法处死小鼠，取其股骨，用酒精纱布清除其上黏附的肌肉及结缔组织。剔除干净后，用剪刀剪去股骨两端少许骨骺及骨皮质，暴露出红骨髓。用5ml注射器吸取0.075mol／LKCl 2.5ml，插人股骨一端，冲洗骨髓腔，将冲洗液收集到5ml刻度离心管中（注意不要让组织掉人离心管中），再用注射器吸取0.075mol／L KCl 2.5ml，插入股骨另一端，冲洗骨髓腔，将冲洗液收集到同一刻度离心管中，吹打均匀。共收集5ml冲洗液。
……
