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　　分類: 图书,自然科学,生物科学,分子生物学,

作者： 朱旭芬编著

出 版 社： 高等教育出版社

出版时间： 2006-1-1字数： 330000版次： 1页数： 211印刷时间： 2008/01/01开本： 16开印次： 3纸张： 胶版纸I S B N ： 9787040183641包装： 平装内容简介

本书以基因克隆为主线，选编了35个实验，包含了从核酸与质粒的提取、基因文库构建与筛选、基因分离方法的确定、PCR法获得基因、克隆载体和表达载体的重组、重组子的鉴定，基因的表达到表达产物——蛋白的纯化、鉴定等相关的实验技术内容。同一实验项目提供了多种可供选择的实验方法，并强调指出了实验中的注意事项，还对与实验相关的内容进行了评议。

选编的实验内容衔接紧密，在实际教学时，可以针对不同层次、不同学时数的要求，既可以集中在两个星期连续进行，也可以分成十次实验阶段性完成。为提高教学效率，作者还将实验安排分时段详细列于实验计划表中，便于教师组织实验教学。

目录

实验计划表

导论

1 基因文库的构建

1—1 染色体DNA的提取

1—2 总RNA和mRNA的提取

1—3 噬菌体DNA的提取

1—4 染色体DNA的部分消化

1—5 基因组文库的构建

1—6 cDNA合成

1—7 cDNA文库的构建

2 目的基因的获得

2—1 PCR扩增及RT—PCR

2—2 核酸电泳

2—3 核酸探针的标记及检测

2—4 核酸探针筛选基因文库

3 载体质粒的制备

3—1 质粒DNA的提取与纯化

3—2 核酸纯度、浓度与相对分子质量的测定

4 扩增质粒的构建

4—1 限制性内切酶的酶切反应

4—2 凝胶电泳法进行DNA的分离、提纯

4—3 DNA片段的体外连接

5 重组DNA导入宿主细胞

5—1 感受态细胞的制备

5—2 重组质粒的转化

6 重组子的筛选与鉴定

6—1 阳性克隆的筛选

6—2 测序与序列同源性分析

6—3 Southern印迹

7 表达质粒的构建与诱导表达

7—1 表达质粒的构建

7—2 Northern印迹

7—3 外源基因的诱导表达

7—4 SDS—PAGE

7—5 Western印迹

7—6 酶联免疫吸附测定(E1ISA)

7—7 蛋白质生物功能测定法

8 工程菌的培养与目标产物分离

8—1 发酵条件的优化

8—2 诱导表达蛋白质的分离沉淀

8—3 凝胶过滤层析

8—4 离子交换层析

8—5 蛋白质浓度的测定

8—6 酶活性的测定

8—7 分离纯化蛋白的收率计算与保存

参考文献

附录1 简写

附录2 实验注意事项

附录3 如何撰写实验报告

附录4 常用的碱基、氨基酸符号及缓冲液

附录5 大肠杆菌基因型

附录6 培养基与试剂的配制

附录7 实验仪器

 

 

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