细胞生物学实验方案(生物实验室系列)(Cell Biology Protocols)
点此进入淘宝搜索页搜索分類: 图书,科学与自然,生物科学,细胞生物学,
品牌: 吕社民
基本信息·出版社：化学工业出版社
·页码：244 页
·出版日期：2009年09月
·ISBN：7122061671/9787122061676
·条形码：9787122061676
·包装版本：第1版
·装帧：平装
·开本：16
·正文语种：中文
·丛书名：生物实验室系列
·外文书名：Cell Biology Protocols
产品信息有问题吗？请帮我们更新产品信息。
内容简介近年来，细胞生物学领域取得了迅速的发展和进步。细胞生物学工作者对实验技术的需求日益增长，其中的许多技术也适用于分子生物学和分子遗传学。《细胞生物学实验方案》收录了许多很实用的细胞生物学实验方案，具体表现在：实验方案涵盖了光学显微术、电子显微术、细胞培养、细胞分离、细胞器的分离和功能分析、组织和膜分离以及体外实验技术；
许多实验方案都提供了有用的“注释”和“安全措施”，便于操作；
附录部分则收录了对于细胞生物学工作者来说非常有价值的生物学参考数据。
《细胞生物学实验方案》可供细胞生物学，分子生物学、基因组学，蛋白质组学等领域的研究生、高年级本科生及其他研究人员阅读参考。
编辑推荐《细胞生物学实验方案》：生物实验室系列。
目录
1 光学显微镜基础
1.1 简介
1.2 复式显微镜的关键部件
1.2.1 镜体和镜灯
1.2.2 聚光镜
1.2.3 载物台和聚焦机制
1.2.4 物镜
1.2.5 目镜
1.3 显微镜使用技术
1.3.1 明视野显微镜术
实验方案1.1 明视野显微镜的调节
实验方案1.2 调定柯勒照明
1.3.2 油镜的使用
实验方案1.3 调焦步骤
1.3.3 相差显微镜术
实验方案1.4 相差显微镜的调节
1.3.4 微分干涉对比显微镜术
1.3.5 暗视野显微镜术
1.3.6 荧光显微镜术
实验方案1.5 调定落射荧光显微镜
1.3.7 共聚焦显微镜术
1.3.8 常见问题及显微镜保养和维修
1.4 样本的准备和染色
1.4.1 附着
实验方案1.6 多聚L-赖氨酸包被
1.4.2 固定
1.4.3 准备组织切片
1.4.4 染色
参考文献
2 电子显微镜基础
2.1 简介
2.2 可用的电子显微镜方法
2.2.1 负染色法
2.2.2 玻璃化技术
2.2.3 金属投影和冰冻断裂技术
2.2.4 免疫标记
2.2.5 专门技术
2.2.6 设备与试剂的危险性
实验方案2.1 聚乙烯醇缩甲醛-碳、连续碳和多孔碳支持膜的制备
实验方案2.2 “微滴”负染色步骤（使用连续碳、聚乙烯醇缩甲醛-碳及多孔碳支持膜）
实验方案2.3 免疫负染法
实验方案2.4 负染色-碳膜技术：细胞及细胞器的分裂
实验方案2.5 未染色及负染色的玻璃化样本制备
实验方案2.6 生物样品的金属投影技术
实验方案2.7 组织加工及树脂包埋的常规实验方案
实验方案2.8 对细胞及细胞器悬液的琼脂糖胶囊化
实验方案2.9 电镜超薄切片的常规染色
实验方案2.10 包埋后薄切片的间接免疫标记
实验方案2.11 使用免包埋电子显微镜技术显示核基质和细胞骨架
致谢
参考文献
3 细胞培养
3.1 细胞：分离和分析
3.2 机械法分离组织
实验方案3.1 机械剪切作用使组织解聚
实验方案3.2 使用温热的胰蛋白酶使组织解聚
实验方案3.3 冷胰蛋白酶消化
实验方案3.4 应用胶原酶或中性蛋白酶解聚
3.3 从体液中分离细胞
实验方案3.5 从渗出液中回收细胞
3.4 去除红细胞
实验方案3.6 急速裂解法去除红细胞
实验方案3.7 等密度离心法去除红细胞和死细胞
3.5 细胞计数和细胞活力
实验方案3.8 细胞计数和活力测定
3.6 细胞培养的用途
实验方案3.9 从单层培养物回收细胞
3.7 冷藏
实验方案3.10 冻存细胞
实验方案3.11 解冻细胞
3.8 外周血单核细胞的分离
3.8.1 应用密度阻滞
3.8.2 应用混合技术
3.8.3 应用阻滞漂浮技术
实验方案3.12 密度阻滞法纯化人外周血单核细胞
实验方案3.13 混合剂技术纯化人外周血单核细胞
实验方案3.14 阻滞浮选技术纯化人外周血单核细胞
参考文献
4 细胞器的分离与功能分析
4.1 简介
4.2 匀浆化
4.3 差速离心
4.3.1 器材
4.4 密度梯度离心
4.5 细胞核及核组分
4.5.1 细胞核
4.5.2 核组分
4.6 线粒体
4.6.1 酶标记物
4.7 溶酶体
4.7.1 酶标记物
4.8 过氧化物酶体
4.8.1 酶标记物
4.9 粗面与光面内质网
4.9.1 酶和化学标记物
4.10 高尔基膜
4.10.1 酶标记物
4.11 质膜
4.11.1 用酶标记物分析质膜
4.12 叶绿体
4.12.1 叶绿体功能分析
实验方案4.1 用碘克沙醇梯度溶液从哺乳动物肝脏中分离细胞核（并注意培养细胞）
实验方案4.2 中期染色体的分离
实验方案4.3 核膜的分离
实验方案4.4 核孔复合物的分离
实验方案4.5 核基质的制备
实验方案4.6 核仁的制备
实验方案4.7 用差速离心法从大鼠肝脏中分离重线粒体组分
实验方案4.8 从组织和培养细胞中制备轻线粒体组分
实验方案4.9 用Nycodenz不连续梯度溶液纯化酵母线粒体
实验方案4.10 用中等载量Nycodenz不连续梯度溶液从哺乳动物肝脏或培养细胞中纯化线粒体
实验方案4.11 琥珀酸-碘代硝基四唑盐紫还原酶检测
实验方案4.12 不连续Nycodenz梯度溶液中溶酶体的分离
实验方案4.13 β-半乳糖苷酶（分光光度测定）
实验方案4.14 β-半乳糖苷酶(荧光测定)
实验方案4.15 碘克沙醇梯度提取哺乳动物的过氧化物酶体
实验方案4.16 过氧化氢酶检测
实验方案4.17 碘克沙醇梯度溶液分析主要细胞器
实验方案4.18 蔗糖梯度溶液分离光面及粗面内质网
实验方案4.19 以自生成碘克沙醇梯度溶液分离光面与粗面内质网
实验方案4.20 NADPH-细胞色素c还原酶检测
实验方案4.21 葡萄糖-6-磷酸酶检测
实验方案4.22 RNA分析
实验方案4.23 从肝脏分离高尔基膜
实验方案4.24 UDP-半乳糖半乳糖基转移酶的检测
实验方案4.25 人血影细胞的纯化
实验方案4.26 大鼠肝脏中细胞膜的分离
实验方案4.27 5′-核苷酸酶测定
实验方案4.28 碱性磷酸二酯酶测定
实验方案4.29 哇巴因敏感的Na+/K+-ATP酶测定
实验方案4.30 绿叶或豌豆幼苗中叶绿体的分离
实验方案4.31 叶绿体中叶绿素含量的测定
实验方案4.32 叶绿体完整性的测定
参考文献
5 在跨膜运输和细胞信号转导研究中使用的亚细胞膜的分级分离方法
5.1 简介
5.2 可采用的研究方法
5.3 质膜区域
5.4 参与内质网-高尔基体-质膜路径的膜区室的分析
5.4.1 蔗糖-D2O梯度
5.4.2 浮力密度碘克沙醇梯度（预形成）
5.4.3 沉降速度碘克沙醇梯度（预形成）
5.4.4 用SDS-PAGE和蛋白印迹进行分析
5.5 从胞浆蛋白中分离膜囊泡
5.6 内吞作用
5.6.1 配体标记
5.6.2 组织系统
5.6.3 细胞系统
5.6.4 分析
实验方案5.1 利用蔗糖梯度从哺乳动物肝脏分离基底外侧和胆汁小管的质膜区域
实验方案5.2 用抗体结合珠分离大鼠肝脏窦状区域
实验方案5.3 用蔗糖梯度溶液从Caco-2分离顶端和基底外侧区域
实验方案5.4 碘克沙醇梯度离心法从MDCK细胞中分离顶端和基底外侧区域
实验方案5.5 脂筏的分离
实验方案5.6 细胞膜小凹的分离
实验方案5.7 利用不连续蔗糖-D2O密度梯度分析细胞的高尔基体和内质网亚结构
实验方案5.8 利用连续碘克沙醇密度梯度法分析细胞的高尔基体、内质网、内质网-高尔基体中间复合物和其他膜结构
实验方案5.9 利用连续或非连续沉淀速率碘克沙醇密度梯度分析细胞的高尔基体、内质网、反式高尔基网络和其他膜结构
实验方案5.10 细胞膜蛋白的SDS-PAGE
实验方案5.11 半干印迹
实验方案5.12 用增强化学发光法检测印迹蛋白
实验方案5.13 从哺乳动物细胞和细菌中分离胞膜以及胞质组分
实验方案5.14 分析在碘克沙醇组分中的早期和再循环的内吞体、转染的MDCK细胞中对转铁蛋白的内吞作用
实验方案5.15 利用自生成的碘克沙醇梯度分析笼形蛋白包被囊泡的加工、大鼠肝脏无唾液酸糖蛋白的内吞作用
实验方案5.16 多聚蔗糖-Nycodenz-梯度用于分析哺乳动物肝脏中致密内体-溶酶体活动
参考文献
6 体外实验技术
6.1 简介
实验方案6.1 使用人类无细胞系统的偶联DNA修复合成的核小体装配
实验方案6.2～实验方案6.4——简介
实验方案6.2 用卤代脱氧胸腺嘧啶核苷类似物单标新生DNA
实验方案6.3 用不同卤代脱氧胸腺嘧啶核苷类似物双标DNA
实验方案6.4 同时对蛋白质和取代卤素-dU的DNA进行免疫染色
实验方案6.5 暴露培养细胞内的核基质
实验方案6.6～实验方案6.7核基质与核纤层的相互作用——简介
实验方案6.6 核基质-核纤层蛋白相互作用：体外印迹覆盖分析
实验方案6.7 核基质-核纤层蛋白相互作用：体外核重组装分析
实验方案6.8 非洲爪蛙卵提取物的制备和免疫耗竭
实验方案6.9 体外核组装和免疫荧光
实验方案6.10 应用离体非洲爪蛙卵母细胞核检测核质之间的转运
实验方案6.11 在核膜片的微阵列中用光学单转运体记录的方法检测转运
6.2 细胞和膜系统
实验方案6.12 链球菌溶血素O导致的细胞透化作用
实验方案6.13 纳米胶囊：细胞内传送药物的新型载体
致谢
实验方案6.14 酵母中抗氧化蛋白保护作用的检测方法的快速筛选
实验方案6.15 神经细胞凋亡的体外检测
实验方案6.16～实验方案6.20线粒体膜通透性的转变——简介
实验方案6.16 线粒体膜通透性转变的测定：共聚焦激光成像法检测细胞或分离的线粒体中通
透性转变与Δψm的降低
实验方案6.17 线粒体膜通透性转变的测定：用罗丹明123通过荧光计来检测通透性转变与Δψm的降低
实验方案6.18 线粒体膜通透性转变的测定：用流式细胞仪检测细胞及分离的线粒体中通透性转变与Δψｍ的降低
实验方案6.19 用蛋白印迹检测分离的线粒体中细胞色素c的释放
实验方案6.20 将蛋白质输入分离的线粒体
实验方案6.21 体外三元可溶性NSF附着蛋白受体复合物的生成
实验方案6.22 肝脏内质网的体外重构
实验方案6.23 糖脂不对称地掺入膜以及脂质跨膜运动的检测
实验方案6.24 从大鼠脑组织纯化网格蛋白包被的囊泡
实验方案6.25 在脂单层上重构内吞中间体
实验方案6.26 高尔基膜管的形成
实验方案6.27 紧密连接组合体
实验方案6.28 重构主要捕光叶绿素a-捕光叶绿素b复合体到脂质体
实验方案6.29 重构光系统2到脂质体
实验方案6.30 体内及体外的高尔基体-波形蛋白相互作用
6.3 细胞骨架和纤维系统
实验方案6.31 微管过氧化物酶体相互作用
实验方案6.32 免疫金免包埋电子显微镜法测定细胞基质蛋白
实验方案6.33 紫杉醇和其他微管组装启动子诱导的微管组装
实验方案6.34 波形蛋白的产生、纯化和组装及利用电子顺磁共振的研究
实验方案6.35 神经丝装配
实验方案6.36 微管蛋白诱导α-突触核蛋白形成
实验方案6.37 体外合成β-淀粉样纤维
实验方案6.38 体外可溶性Aβ1-42肽诱导的τ样过磷酸化
实验方案6.39 反义肽
实验方案6.40 β-淀粉样蛋白和酶的相互作用
实验方案6.41 Aβ的磷酸化
实验方案6.42 体外Smitin-肌球蛋白Ⅱ装配测定
实验方案6.43 在EF-手型钙结合蛋白S100A4存在条件下，体外组装/拆卸肌球蛋白丝
实验方案6.44 体外组装胶原纤维
参考文献
7 细胞和分子生物学参考数据
7.1 化学品安全信息
7.2 离心资料
7.2.1 离心力的计算
7.2.2 转子的应用
7.2.3 沉淀时间的计算
7.2.4 离心设备的保养
7.3 放射性同位素数据
7.3.1 核酸酶抑制剂
索引
……[看更多目录]
序言细胞生物学成为迅猛发展的学科得益于持续的技术进步。我们试图编纂一部令人兴奋、又有广泛用途的细胞生物学技术书籍，使其包括屡试不爽的实验方法又有新近建立的技术方案。因此，本书包含了现代细胞生物学各方面实用的常规和时新实验方案。本书首先介绍了基本光学显微镜技术，继之介绍用于投射显微镜研究的不同细胞、亚细胞和生物大分子标本制备的基本技术。后续一章涉及到细胞培养和细胞分离技术。这些技术广泛地用于为细胞研究提供初始的实验材料。此后两章是本书的主要内容，介绍了不少用于研究亚细胞的细胞器和分离细胞膜组分的技术。再下一章中，包括了44个用于体外研究的特殊技术和细胞生物学的综合技术，每项技术均由该领域的知名专家提供。最后在参考数据一章中提供有关化学品安全、离心和放射性同位素方面的有用信息。本书具有很强的实用性，对不同层次的从事细胞生物学的研究者均具有指导意义。
文摘插图：
1 光学显微镜基础
1.1 简介
对于细胞与分子生物学家来说，不管是在活着的还是固定的细胞中研究细胞结构及其生物进程，光学显微镜都是一项不可替代的技术。本章概述了光学显微术，描述了重要的光镜部件，进一步介绍了在明视野和相差显微镜中，如何调定符合研究标准的光学显微镜。还有一小部分是有关共聚焦显微镜的。对不同形式光镜的更详细的描述可见于其他文献。
显微镜是一种可以让标本产生放大图像的仪器。目镜和物镜是光镜放大系统的主要组成部分，这两者的放大倍数的乘积就是显微镜的总放大倍数。而放大标本的可见度主要取决于对比度和分辨率。对比度就是物体和其背景间的光密度差异。一些生物标本内存在有色化合物，如着色的动物细胞和植物细胞中含有叶绿素的叶绿体，但是，大部分生物标本都是无色的，在观察前必须要固定和染色。明视野显微镜术就是用来观察这些染色标本。
